共焦拉曼顯微鏡在生物樣品中的應(yīng)用
更新時(shí)間：2018-12-28 點(diǎn)擊次數(shù)：2021次
我們這里有做生物樣品的共焦拉曼顯微鏡的，在獲得的圖里面有很強(qiáng)的熒光，有的說(shuō)，如果拉曼得不到就用其熒光譜。可我想問(wèn)一下，在拉曼譜里面得到的熒光背景，是真正的熒光特征譜嗎?這和熒光光譜儀里面的熒光圖有什么區(qū)別?
1. 原則上說(shuō)，拉曼譜中的熒光和熒光譜中的熒光是一樣的，只要激發(fā)波長(zhǎng)和功率密度相同。注意橫坐標(biāo)要從波數(shù)變換為納米，即用10000000nm(1cm)除以波數(shù)就行了。但有一點(diǎn)要注意，不同波長(zhǎng)的激發(fā)光照射樣品，得到的拉曼相近，但熒光可以有很大不同，甚至相同波長(zhǎng)不同功率激發(fā)，熒光譜都大不一樣。
2. “注意橫坐標(biāo)要從波數(shù)變換為納米，即用10000000nm(1cm)除以波數(shù)就行了”?
Raman測(cè)定的是散射光，得到的是Raman shift. Raman shift和波長(zhǎng)(熒光光譜)之間要一個(gè)轉(zhuǎn)換的吧。
3. 生物樣品一般熒光峰比較寬，用熒光光測(cè)試之前一般先會(huì)做儀器本身曲線(xiàn)校正也就是儀器本身的響應(yīng)曲線(xiàn)，這樣測(cè)出的熒光峰才比較準(zhǔn)，特別是對(duì)于寬峰更要做這個(gè)較準(zhǔn)。
而Raman光譜一般采集的區(qū)域比較窄(指的是波長(zhǎng)區(qū)域)，一般在窄的波長(zhǎng)范圍變化不大，因此一般不考慮儀器本身響應(yīng)曲線(xiàn)誤差，但是Raman光譜來(lái)測(cè)寬熒光峰，影響就比較大。
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